流式細胞儀怎么分選T細胞?

2024-11-18 上文介紹了流式細胞術的原理及應用，今天讓我們學習一下怎么用流式細胞儀分選T細胞吧~一、樣本制備1.取樣:取100μL抗凝血。2.標記：根據抗體說明書標記實驗管。混勻后，室溫避光孵育15分鐘。3.溶血：將10×裂紅液用水稀釋10倍，每管加入1mL，振蕩器混勻后室溫避光靜置10分鐘，300g，4°C離心5分鐘。4.洗滌：棄去上清，加入1mL1×PBS洗液，300g離心洗滌5分鐘，洗2-3次。5.上機檢測：棄去上清后加入500μL1×PBS，混勻懸浮后過濾，避光等待上機檢測。二、儀...

流式細胞術原理及應用

2024-11-15 流式細胞儀在手，卻不知道原理？快來看看這篇文章吧！一、流式細胞術實驗原理流式細胞術（FlowCytometry,FCM）是一種單細胞定量分析技術，該技術通過測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收等參數，可以定量分析細胞的結構特征（如DNA含量、蛋白、細胞膜、胞漿或胞核抗原表達量）和功能特征（如細胞內酶活性、鈣流變化等）等多種重要參數，進行細胞特征分析與分選。它的核心功能是將混合物中的不同細胞分離并計數，將感興趣的細胞分選出來，提供分類比例并進行進一步分析。二、流式細胞技術應用1...

引物探針的使用方法有哪些？

2024-11-14 一、引物探針的使用步驟?引物探針使用步驟一：?設計引物和探針?：首先需要根據目標DNA序列設計特異性引物和探針。引物的長度一般為20-25個核苷酸，探針的長度一般為15-25個核苷酸。設計時要注意避免非特異性擴增，確保引物的特異性和探針的Tm值比引物Tm值高8-10°C?。引物探針使用步驟二：?提取模板DNA?：從待測樣本中提取DNA，作為PCR反應的模板。確保模板DNA的質量和濃度，以獲得可靠的實驗結果?。引物探針使用步驟三：?配制PCR反應體系?：根據實驗需求，配制含有引...

IHC出現假陽性、假陰性等問題該怎么辦?

2024-11-13 ?免疫組化（IHC）實驗中出現假陽性和假陰性了怎么辦呢？一、假陽性的處理1.?降低一抗濃度?：通過降低一抗的濃度，可以減少非特異性結合，從而降低假陽性。通常，降低濃度至能看到陽性表達且能明顯區分陽性區域與周圍間質即可?。2.?調整封閉條件?：逐步提高封閉條件，從山羊血清到5%BSA+山羊血清，最終至5%脫脂奶。通常調整至5%BSA+山羊血清即可，不建議輕易使用5%脫脂奶?。3.?選擇合適的二抗?：對于動物標本，選擇抗鼠或抗兔的二抗，避免使用通用型二抗，以免種屬間抗原抗體反應引...

離心柱法提取DNA步驟

2024-11-13 常見核酸提取純化方法苯酚氯仿抽提法、磁珠法核酸分離技術、離心柱純化法等，今天我們來看下離心柱法的實驗步驟和優缺點吧~一、離心柱法提取DNA步驟離心柱法提取DNA步驟一將組織或細胞懸液加入裂解緩沖液，渦旋混勻。裂解緩沖液中含有變性劑（如胍異硫氰酸鹽），可以有效地裂解細胞和組織，破壞細胞膜和細胞核膜，同時使核酸與蛋白質分離。離心柱法提取DNA步驟二將裂解液轉移到DNASpinColumn中，離心收集流穿液。這個步驟涉及到將裂解液通過一個特殊的膜過濾，該膜具有特定的孔徑，允許小分子...

Alzet滲透泵濃度你會計算嗎？

2024-11-12 藥物濃度的調配需根據每日用藥量和緩釋泵的輸送速率兩項參數來計算，每日用藥量可通過查閱專業文獻獲取。此外，每支緩釋泵的輸送速率信息會附在包裝盒上，應根據包裝上的速率進行配藥。濃度計算舉例：2001滲透泵，給藥：抗利尿激素(ADH)，1.查閱文獻發現，大鼠正常的ADH分泌量為30ng/天/只，或1.25ng/小時/只。然后，計算出完成1.25ng/小時所需輸注量所需的ADH濃度：ko=Q?Cd其中ko(µg/hr)是質量輸送速率，Cd(µg/µ...

如何對pcr結果進行分析?

2024-11-12 一、PCR結果分析的基本步驟：?1.基線設置?：實時PCR反應的基線是指在PCR的初始循環期間的信號水平，通常是3至15個循環之間，此時熒光信號幾乎沒有變化，可以認為是背景或反應的噪音。2.?閾值設定?：?qPCR的閾值代表的是明顯超出基線的擴增信號水平，用以區分明確的擴增信號和背景。通常qPCR儀器自帶軟件會自動將閾值設置為基線熒光值標準偏差的10倍。3.?CT值計算?：Ct是指熒光信號超過閾值時對應的循環數，Ct值與目的基因的起始量成反比，可用于計算DNA初始拷貝數。4....

DMEM培養基變色原因

2024-11-12 DMEM(Dulbecco'sModifiedEagleMedium)培養基廣泛應用于細胞培養。一般情況下DMEM培養基呈鮮紅色，當細胞狀態、培養條件以及培養基成分發生變化，培養基的顏色也會發生變化。以下是DMEM培養基變色的常見原因：1.pH值變化DMEM培養基中含有酚紅，它是一種pH指示劑，能夠根據培養基的pH值變化而改變顏色。在pH值低于6.8時培養基呈黃色，pH在7.4時為紅色，pH高于8.2時則呈紫色。2.細胞代謝活動細胞在代謝過程中，會消耗培養基中的糖分并產生乳酸...