慢病毒轉染貼壁細胞全流程詳解

2025-02-06 慢病毒轉染貼壁細胞全流程詳解一、細胞種板將細胞種在12孔板中，每孔1.5×10^5個細胞。每孔加入1mlwan全培養基。二、病毒感染1.待細胞生長至30%～50%時開始轉染。2.將病毒從冰箱取出，放在冰上融化。3.打開生物安全柜，關閉風機，戴好帽子和口罩。4.棄去培養基，用PBS洗三次。5.每孔加入500ulwan全培養基。6.根據公式計算每孔所需病毒量：每孔病毒量（μL）=MOIx細胞數/病毒滴度（TU/mL）×1000。7.4小時后，再向孔板中加入500ulwan全培養基...

小分子蛋白的WB該如何？

2025-01-23 WB（WesternBlot）是一種常用的生物化學實驗技術，用于檢測和分析蛋白樣品中特定蛋白質的存在和表達水平。它通過將樣品中的蛋白質分離并轉移到膜上，然后使用特定的抗體識別目標蛋白，并通過化學或免疫檢測方法來可視化這些蛋白質。WesternBlot技術通常包括樣品制備、SDS-PAGE電泳分離、蛋白轉印、封閉和抗體檢測、曝光顯影等步驟。目前WB被廣泛應用于生物醫學研究中，用于研究蛋白質表達、翻譯后修飾以及蛋白質相互作用等。圖1.WB流程圖在日常實驗過程中，小分子蛋白是非常常...

明明凍存的時候細胞長得好好的，怎么一復蘇就完啦？

2025-01-21 不知道大家是否會遇到細胞凍存的時候狀態非常不錯，結果等到需要用到該細胞的時候怎么也復蘇不起來的情況啊？或許可能是凍存細胞的時候出現了什么差錯？一.細胞凍存的原則：慢凍，細胞在冷凍過程中，如果降溫過快，會形成大的冰晶，這些冰晶會破壞細胞結構，導致細胞死亡。詳細版本見《細胞凍存的原理是什么？》二.凍存液的配置：常用配置比例：培養基:血清:DMSO=7:2:1適用于大多數細胞系，能夠保證細胞在凍存過程中有較高的存活率。血清:DMSO=9:1適用范圍：適用于需要長時間保存或者具有特別...

CCK8實驗注意事項

2025-01-20 CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準確的進行細胞增殖和毒性分析。基本原理：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓liu酸2甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增...

CCK8實驗一文就懂！

2025-01-20 前面我們在文章《為什么CCK8鏡下趨勢是對的，測出來的OD值卻不對？？》中cue到過CCK8實驗，那么CCK8具體到底是什么呢，讓我們今天一起詳細了解下吧~一、CCK-8實驗的基本定義與原理CCK-8實驗是一種廣泛應用于細胞生物學研究的細胞增殖和毒性檢測方法。其基本原理在于利用細胞內的代謝酶將無色的CCK-8試劑（CellCountingKit-8）中的WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽）還原為具有高...

流式細胞術的特點及應用

2025-01-17 一、流式細胞術特點速度快:流式細胞術是一種快速的實驗技術，通過對單個細胞或生物顆粒進行逐個檢測，測量速度可達每秒數千甚至上萬個細胞。靈敏度高:每個細胞只需帶有1000~3000個熒光分子，流式細胞術就能夠準確檢測出來。這種高靈敏度的特性使得流式細胞術成為研究復雜生物系統和細胞內分子水平變化的重要工具。多參數:可應用于多參數分析，通過多色熒光染色同時對單個細胞或生物顆粒的多種特征進行細致分析。這種高度精密的方法使研究人員能夠深入研究細胞的內部結構和功能，為疾病診斷和治療提供重要...

兩種流式細胞儀，你選哪種？

2025-01-16 分析型流式細胞儀檢測原理將待測樣品制成單細胞懸液，在鞘液的包裹下進入流式細胞儀內的檢測區域，細胞在激光的照射下會發生散射和折射，產生的散射光信號和熒光信號由不同的通道接收。其中前向角散射光（FSC）的強度與細胞直徑成正相關，可以理解為細胞直徑越大，FSC越強，細胞直徑越小，FSC越弱。所以可以利用細胞的FSC值初步比較細胞的大小，利用FSC值對細胞進行分群和分類。側向角散射光（SSC）的強度與細胞內顆粒結構復雜程度成正相關（與細胞中所含的細胞器、細胞核等的數量成正比），可以理...

流式細胞術一文Get

2025-01-16 一、流式細胞術流式細胞術（FlowCytometry，FCM）從字面意義理解，Flow—Fluid、Cyto—Cell、Metry—Measurement，是一種對液流中排成單列的細胞或其它生物微粒（如微球，細菌，小型模式生物等）逐個進行快速定量分析和分選的技術。其特點是通過快速測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收來定量測定細胞DNA含量、細胞體積、蛋白質含量、酶活性、細胞膜受體和表面抗原等許多重要參數。根據這些參數將不同性質的細胞分開，以獲得供生物學和醫學研究用的純細胞群體...