WB實(shí)驗(yàn)之內(nèi)參蛋白的選擇

2024-09-29 在進(jìn)行WB（WesternBlot）實(shí)驗(yàn)時(shí)，選擇合適的內(nèi)參確實(shí)至關(guān)重要。內(nèi)參的主要作用是像一把“尺子”，用來衡量和校正每個(gè)樣本的上樣量，以及在上樣過程中可能產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)誤差。這樣，我們就可以更加確信實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，因?yàn)樗鼈円呀?jīng)經(jīng)過了內(nèi)參的校正。一、選擇內(nèi)參需要遵循的原則？1.樣本種屬來源匹配性原則：內(nèi)參蛋白的選擇應(yīng)基于實(shí)驗(yàn)樣本的物種來源。對于哺乳動物細(xì)胞和組織樣本，常用的內(nèi)參包括β-actin、β-tubulin、GAPDH、LaminB等。這些蛋白在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)穩(wěn)定，...

為了獲得完整的全血RNA，血液采集和抽提有什么建議嗎？

2024-09-29 首先血液通常在臨床地點(diǎn)采集，但在其他地方進(jìn)行RNA分離處理。這導(dǎo)致在運(yùn)輸和RNA純化之前需要RNA穩(wěn)定。血液含有復(fù)雜的細(xì)胞成分，含RNA的目標(biāo)細(xì)胞白細(xì)胞，占細(xì)胞質(zhì)量的1%以下。血液中含有的生化物質(zhì)會影響下游的應(yīng)用。如RNA酶、抗凝血?jiǎng)┖脱t素等，需要有專業(yè)的產(chǎn)品進(jìn)行純化。凱杰提出了解決方案：一、EDTA抗凝管采集的新鮮人全血，可搭配QIAampRNABloodMiniKit（貨號：52304）來提取高質(zhì)量的總RNA（＞200nt）；二、采用PAXgenBloodRNATube...

FUJIFILM Wako——CLEM用熒光蛋白表達(dá)載體

2024-09-29 FUJIFILMWako推出了適用于光電關(guān)聯(lián)顯微技術(shù)（CLEM）的熒光蛋白表達(dá)載體。載體表達(dá)的熒光蛋白（CLEM-Red,CLEM-Green）可通過CLEM用熒光恢復(fù)試劑（TUKSolution,TUKSolutionformulticolor）恢復(fù)被氧化鋨淬滅的電子顯微鏡樣品中的熒光，從而實(shí)現(xiàn)使用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀察同一切片。◆載體概要◆產(chǎn)品一覽購前須知：本系列載體僅供科研使用。如有需要，請聯(lián)系FUJIFILMWako代理——天津益元利康生物科技有限公司！FUJIF...

為什么CCK8鏡下趨勢是對的，測出來的OD值卻不對？？

2024-09-27 CCK-8實(shí)驗(yàn)中，鏡下趨勢正確但測出的OD值不準(zhǔn)確的問題可能由多種原因?qū)е?。那么影響CCK8結(jié)果的因素到底有哪些？一、細(xì)胞接種數(shù)量過多首先，細(xì)胞接種數(shù)量過多可能導(dǎo)致OD值過高。當(dāng)細(xì)胞數(shù)量過多時(shí)，它們可能會重疊生長，導(dǎo)致測得的OD值偏高。此外，如果細(xì)胞密度過高，可能會影響藥物的均勻分布，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果?。二、藥物作用時(shí)間不足或鋪板細(xì)胞密度太大其次，藥物作用時(shí)間不足或鋪板細(xì)胞密度太大也可能導(dǎo)致測量不準(zhǔn)確，都可能影響到細(xì)胞的生長狀態(tài)和最終測得的OD值?。三、誤差操作過程中的誤差也...

Wnt信號通路

2024-09-27 一、Wnt信號通路簡介Wnt在1982年shou次在小鼠胰腺癌中發(fā)現(xiàn)，由于此基因激活依賴小鼠乳腺癌相關(guān)病毒基因的插入，因此，當(dāng)被命名為Int-1。之后的研究表明，Int1基因在小鼠正常胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用，與果蠅的無翅（Wingless）基因功能相似，均可控制胚胎的軸向發(fā)育。此后大量研究提示Int1基因在神經(jīng)系統(tǒng)胚胎發(fā)育中的重要性。因兩者基因與蛋白功能的相似性，研究者將Wingless與Int1合并，賦名為Wnt基因。人Wnt基因定位于12q13。在胚胎發(fā)育中，Wnt基因調(diào)...

ROS的檢測方法

2024-09-27 ROS在細(xì)胞生命，應(yīng)激和死亡中具介導(dǎo)作用，今天讓我們來聊下ROS吧~一、ROS簡介活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）廣泛指代氧來源的自由基和非自由基，包含了超氧陰離子（O2-）、過氧化氫（H2O2）、羥自由基（OH-）、臭氧（O3）和單線態(tài)氧（1O2），由于它們含有不成對的電子，因而具有很高的化學(xué)反應(yīng)活性。在機(jī)體內(nèi)，ROS的主要來源之一是線粒體內(nèi)膜的呼吸鏈底物端，在線粒體中的電子傳遞鏈復(fù)合物將電子傳遞給O2的過程中，有一部分O2被還原，形成O2-或H...

無血清培養(yǎng)基配方、使用方法

2024-09-26 一、前言細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在生命科學(xué)研究領(lǐng)域是must的。在科研上，細(xì)胞培養(yǎng)基（medium）一般都會加入血清（Serum）來補(bǔ)充蛋白質(zhì)（protein）、生長因子（growthfactor）或其他營養(yǎng)物質(zhì)（nutrients）等，大部分細(xì)胞培養(yǎng)會選擇使用胎牛血清（fetalbovineserum,FBS）。近年來也陸續(xù)有多樣的血清種類，例如：人類血小板生長因子（platelet-richplasma,PRP）、小牛血清（bovinegrowthserum,BGS）等，中科百抗自研...

細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程

2024-09-26 一、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作對開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。二、取材在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的shou次培養(yǎng)稱為原代...