如何提高電轉效率？

電轉，也稱電穿孔法，是通過脈沖電流在細胞膜上打孔，將外源分子（DNA、RNA 、mRNA等）導入真核細胞內，來改變細胞的特性，從而達到改造細胞的目的，是實現細胞基因功能和蛋白質表達研究的重要工具。那么該如何提高電轉效率呢？讓我們一起來看看吧！

一、細胞收集時：

1)在消化貼壁細胞時，一定要注意終止胰酶反應，防止過度消化；最好使用專業的胰酶中和劑；

2)在進行細胞離心時，使用低轉速長時間離心，提升細胞的存活率；

3)選擇合適狀態的細胞，一般原代細胞可以傳1-2次后使用；盡量挑選迭代次數少的細胞，如果是凍存細胞，建議復蘇1-2h后使用；

4)選擇對數增長期的細胞；

5)做好支原體清除。

二、試劑添加：

1）電轉試劑的添加只需室溫操作即可；

2）細胞在試劑中停留不超20min，混合好盡快開始實驗；

3）轉染的底物占比不能大于總體積的10%，比如轉染體系100ul，底物最多添加10ul；

4）在消化的細胞進行配置時，一定要離心并完quan去除殘留培養基；

5）在加入到電極杯中時，要避免產生氣泡，從而影響電脈沖；

6）對底物進行內毒素控制；

7）轉染試劑與底物濃度配比控制；

8）如果是mRNA轉染，可多洗滌2次。

三、程序設置：

1）使用電轉儀，程序已經設定好，可以根據不同的細胞名稱，選擇對應的最you程序；根據實際情況，可以對程序進行微調，確保轉染效率和細胞存活率。

2）使用需要自行設置的儀器，一般電場強度設置遵循低電場、長時程的原則。

四、細胞重懸：

1）轉染結束之后，可以先停留10min再加培養基重懸；

2）使用無鈣培養基重懸，5-10min后轉移細胞到培養皿上；

3）后續的實驗一般在轉染后24h再進行；

4）電轉后的細胞，鋪板數量翻一倍。

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