用于WB，IP，IHC，IF，ChIP，F(xiàn)C抗體有哪些區(qū)別？

用于WB，IP，IHC，IF，ChIP，F(xiàn)C實驗的抗體有哪些區(qū)別？今天我們一起學(xué)習(xí)一下吧！

WB（western blot，蛋白質(zhì)印跡）：是生命科學(xué)領(lǐng)域?qū)嶒炛幸环N非常常見的分子生物學(xué)實驗技術(shù)，其原理是先利用SDS-PAGE將蛋白質(zhì)進行分離，接著將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后再利用抗體進行蛋白質(zhì)檢測。通過分析條帶大小和顯色信號獲得目標(biāo)蛋白質(zhì)在細(xì)胞或組織樣本中的表達情況。在實驗過程中由于蛋白質(zhì)在電泳前進行了加熱變性，破壞了保持蛋白質(zhì)二級和三級結(jié)構(gòu)的氫鍵，從而使得蛋白質(zhì)發(fā)生了線性化，需要使用識別線性抗原表位的抗體。因此WB抗體一般選用人工合成多肽作為抗原制備出來的抗體。

IHC(immunohistochemical，免疫組化)：是通過抗原抗體特異性免疫反應(yīng)和化學(xué)/熒光呈色反應(yīng)，利用標(biāo)記抗體對細(xì)胞或組織內(nèi)的抗原進行研究的技術(shù)。在進行免疫組化實驗過程中需要將組織或者細(xì)胞進行固定，以維持細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和天然狀態(tài)下的一致，確保組織細(xì)胞抗原特異性的穩(wěn)定。但化學(xué)物質(zhì)的固定會使蛋白質(zhì)變性，與天然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)會存在有一定的區(qū)別，而又不同于WB中加熱變性變成線性的結(jié)構(gòu)。

免疫組化抗體識別的是未經(jīng)加熱變性處理的抗原表位，有的屬于構(gòu)象型，有的屬于線性的，構(gòu)象型表位由于受蛋白空間結(jié)構(gòu)限制，加熱變性會消失，而線性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和變性后的蛋白都含有。因此在做IHC/IF實驗中，最合適是用重組蛋白作為抗原制備出來的抗體，除此之外也可以是人工合成多肽作為抗原制備出來的抗體。如果所用的抗體識別的是線性表位(例如識別蛋白上連續(xù)的幾個氨基酸)那么這種抗體則可以同時用于IHC和WB，而如果抗體識別的是構(gòu)象表位，則只能用于IHC。

IP(Immunoprecipitation，免疫沉淀)：是通過抗原抗體特異性反應(yīng)來純化富集樣品中的目的蛋白的一種方法。一般情況下是使目的蛋白與其對應(yīng)的抗體(protein A/G)形成免疫復(fù)合物沉淀而被收集。根據(jù)檢測目標(biāo)的不同可以將IP技術(shù)分為以下3種：CHIP、RIP、Co-lP。CHIP是利用IP技術(shù)富集蛋白后檢測與其結(jié)合的DNA的量；RIP是檢測與其結(jié)合的RNA的量；Co-IP則是檢測與其結(jié)合的蛋白質(zhì)的量。

免疫沉淀是用抗體去識別結(jié)合自然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)，因此做IP實驗時抗體最好選擇由天然蛋白作為抗原制備出來的抗體，當(dāng)然也可以選擇由重組蛋白作為抗原制備的抗體，注意最好不要選擇由人工合成多肽作為抗原制備的抗體，因為這種抗體識別的位點有可能包裹在蛋白內(nèi)部而無法識別。

FC(flowcytometry，流式細(xì)胞術(shù))：是以IF為基礎(chǔ)發(fā)展起來的一種專門的細(xì)胞分析技術(shù)，主要用于細(xì)胞的分選。流式細(xì)胞中分為兩種，一種是將細(xì)胞固定之后的流式，在選用抗體時保持與IF/IHC 一致即可；另外一種是活細(xì)胞的流式，這種流式最好采用由重組蛋白作為抗原制備出來的抗體或者采用由天然蛋白作為抗原制備的抗體。

在做流式細(xì)胞實驗中由兩種標(biāo)記方法，直接標(biāo)記法和間接標(biāo)記法。使用直接標(biāo)記法時應(yīng)選擇帶有熒光標(biāo)記的一抗；如果研究的蛋白沒有直接標(biāo)記的一抗，則需使用間接標(biāo)記法，在使用間接標(biāo)記法的過程中需注意要同時使用可識別靶標(biāo)抗原一抗和偶聯(lián)熒光染色的二抗。

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